TEER测量中的常见问题

Q：常见的电阻值和跨上皮细胞测量的电阻是一回事吗？

A：不，我们通过EVOM2测量出的原始电阻值乘以细胞生长面积(如生长在细胞培养液上的单层细胞面积)得到最终TEER值。例如：

你在面积为0.5平方厘米的细胞培养皿上培养细胞：

EVOM2测量出的读数为：300Ω

那么TEER= 300 Ω × 0.5 cm2 = 150 Ω-cm2

Q：什么是EndOhm电极？

A：EndOhm电极是为EVOM2专门设计的一个腔室，内部含有一个可移动的孔用于电阻测量；这个腔室内置了一个固定电极，电极的位置和静止对测量组织电阻时有很大影响。

Q：EVOM2如何用于测量细胞融合度（空白电阻）？

A：EVOM2的原理：一旦测量出我们所称的“空白电阻”后，空白电阻=电极本身自带电阻+电极间间隙带来的电阻+液体介质（培养基）体积和摩尔浓度造成的电阻；此后任何实际测量中任何电极电荷的差异都被EVOM2的反极性和平均结果的测量方法所抵消。对同个孔板的连续测量是通过进行电阻测量从而获取了孔板内膜的生长曲线，一旦电阻曲线趋于平稳，我们就可以说膜已经达到了合流（细胞生长完毕）。EVOM2目的是确定膜是否融合，而不是进行详细的分析。(有些膜透性分析可以用EVOM2来研究，但是仅以百分比变化而不是绝对值变化。)

Q：为什么使用EndOhm电极而不是STX电极？

A：EVOM2将首先检测膜上的微孔与空隙，因为电极提供的电流往往会寻求电阻最低的位置进行穿透。由于STX2通用电极可以弯曲和改变电极的间距，而且不将电极固定在孔板中也会增加显著的电阻误差。另一方面，EndOhm电极是固定放置的。当在适当的护理和预处理介质情况下，EndOhm将提供最稳定，可重复和可靠的电阻读数。中心同心电极的添加也确保了整个膜的区域完全暴露在电流流中，因此也不存在盲点区域。

Q：怎么样清理电极？

A：电极清洗包括定期使用酶酶清洁剂(Enzol, Tergazyme)或浸泡在家用漂白剂(3% NaClO)中。漂白剂的作用是将电极含有Ag表面重新氯化，并溶解积累的蛋白质。这两种效应都会改善电极的稳定性。酶清洗剂是一种安全的试剂用于去除电极沉积的介质成分，如DMEM。如果长期使用电极出现DMEM的累积，电阻读数就会上升，也可能造成读数不稳定。

Q：什么是电极的预处理？

A：电极预处理是将电极在测量介质中预浸一段时间，以允许任何外来液体从可渗透的颗粒中迁移出来。酒精通常用于对这些电极进行消毒，酒精会渗入电极，并对电流起到高电阻的作用。当酒精与电极内部的盐水基介质缓慢交换时，电阻读数可期待变低。

Q：是否有简易的TEER数据采集系统？

A：Lab-Trax-4是一个安静，12位，4通道的模拟数字数据记录器，采样速度高达每秒10,000个样本或2500 s/ S/每通道。该单元直接由USB端口供电，可以在现场作为便携式单元在笔记本电脑上使用。此系统可配置四个接口和四个输出端口。

LabScribe3软件易于使用，并实时进行更新以满足最新的需求。同时也支持Mac和Linux系统。如果您使用STX2来进行电阻测量，您可能需要额外的帮手来为您记录数据。如果您在进行测量之前将文本输入到“标记”字段中，那么您只需要在TEER读数稳定下来时按下“enter”键来记录数据。如果您使用的是STX100，那么您就可以完全释放双手了。

在测量TEER过程中可能会遇到的问题：

以下任何一条都有可能改变电阻读数:

1. 电极尖端的间距，禁止擅自扩张或压缩电极尖端的间隙

2. 电极自带的电阻，时刻保持电极处于干净的状态

3. 电极深度，在测量过程中始终保持至少2毫米的的深度使得电极尖端没入溶液

4. 尽量使得电极远离塑料制品

5. 电极位置，尽量保持电极测量重复性的位置

6. 液体阻力，不要让液体蒸发或稀释

7. 液体体积，尽量保持每个孔板内液体体积相同，否则会对电阻读数产生影响

8. 测量过程中保持电极绝对稳定

在同一孔内中反复测量(3-5次)并计算平均值，可用于降低误差。

一些建议用于控制实验参数来获得更准确的TEER数值：

1. 众所周知，温度会影响TEER值。我们建议您保持一致的温度以获得一致的实验数据。因为读数是在细胞培养基中获得的。我们建议您使用一个固定温度的水浴来加热实验期间使用的介质/缓冲液。一致的介质/缓冲温度保证了一致的实验条件。我们建议在进行测量前，将包含在培养基上生长的细胞孔板从培养箱中取出至少20分钟，使孔板在室温下稳定后再进行测量。

2. 如果您使用的是EndOhm电极，请确保顶部和底部电极之间保持相同的固定距离，以获得一致的读数。如果你使用的是STX2直立式电极，试着将它保持在一个垂直的位置，同时进行测量。在进行实验时，保持电极处于孔板内相同的位置，预计将显示一致的读数。

3. 我们建议在细胞培养孔的顶部或基底外侧(例如，细胞培养孔的下部位于12孔板的孔内)使用相同离子浓度的相同液体。在测量过程中，如果您在侧面使用1X PBS缓冲液，我们建议在基底外侧使用1X PBS缓冲液。我们还建议两个液位(细胞培养孔插入的内部和外部)处于相同的高度，以尽量减少压力差。在实验过程中，顶端孔/侧孔首先被液体填满，以防止滤膜因静水压力而从过滤器中脱落。